Полтавський Хресто-Воздвиженський монастир заснований у 1650 р. як чоловічий ігуменом Мгарського монастиря Калістратом при сприянні київського митрополита Сильвестра Косова на кошти полтавського полковника М. Пушкаря та представників козацької старшини І. Іскри та І. Крамаря. Розташовувався на горі над р. Полтавкою на Північному Сході від Полтавської фортеці.
Спершу всі споруди були дерев'яними. У 1689 р. коштом гетьмана І. Самойловича почалося спорудження мурованого Хрестовоздвиженського собору.
У 1695 р. Полтавський Xрестовоздвиженський монастир спустошений Кримськими татарами. У 1709 р. під час облоги Полтави, захоплений шведами, які встановили на горі артилерію і звідти обстрілювали місто.